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          臨床ELISA測(cè)定中可能會(huì)出現(xiàn)的問題

          發(fā)布時(shí)間: 2016/2/17  點(diǎn)擊次數(shù): 702次
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          盡管ELISA測(cè)定的操作步驟非常簡(jiǎn)單,但有可能會(huì)影響測(cè)定結(jié)果的因素卻較多,分布在測(cè)定操作的各步之中,尤以加樣、溫育和洗板為甚。為幫助大家分析查找測(cè)定中出現(xiàn)問題的可能原因,特對(duì)常見問題及原因歸納總結(jié)于下表。   
          臨床ELISA測(cè)定中可能會(huì)出現(xiàn)的問題及可能的原因問題 
          可能的原因(非試劑盒本身的原因) 

          1.弱陽(yáng)性質(zhì)控樣本檢測(cè)不出 溫育的時(shí)間或溫度不夠;顯色反應(yīng)時(shí)間太短;所用配制緩沖液的蒸餾水有問題 
          2.測(cè)定的重復(fù)性差 (相同樣本兩次測(cè)定結(jié)果不一致) 這是典型的由測(cè)定操作引起的問題,包括 
          (1)加樣本及試劑量不準(zhǔn);孔間不一致; 
          (2)加樣過快,孔間發(fā)生污染; 

          (3)加錯(cuò)樣本; 

          (4)加樣本及試劑時(shí),加在孔壁上部非包被區(qū); 
          (5)不同批號(hào)試劑盒中組分混用; 
          (6)溫育時(shí)間、洗板、顯色時(shí)間不一致; 
          (7)孔內(nèi)污染雜物; 
          (8)酶標(biāo)儀濾光片不正確; 

          (9)血清標(biāo)本未*凝固即加入,反應(yīng)孔內(nèi)出現(xiàn)纖維蛋白凝固或殘留血細(xì)胞,易出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)等。
           3.白板 
          (陽(yáng)性對(duì)照不顯色) 
          (1)漏加酶結(jié)合物; 

          (2)洗板液配制中出現(xiàn)問題,如量筒不干凈,含酶抑制物(如疊氮鈉)等。 
          (3)漏加顯色劑A或B; 
          (4)終止劑當(dāng)顯色劑使用。 

          4.全部板孔均有顯色 
          (1)洗板不干凈; 
          (2)顯色液變質(zhì); 

          (3)加底物的吸光受酶污染; 
          (4)洗板液受酶等污染。
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