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          氧化低密度脂蛋白ELISA試劑盒原理介紹

          發(fā)布時(shí)間: 2016/8/5  點(diǎn)擊次數(shù): 784次
          提 供 商: 研域(上海)化學(xué)試劑有限公司 資料大小:
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          資料類型: DOC 瀏覽次數(shù): 784
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          使用目的:
          本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)含量。
          氧化低密度脂蛋白ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
          本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)水平。用純化的人
          氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入
          氧化低密度脂蛋白(ox-LDL),再與HRP 標(biāo)記的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)抗體結(jié)合,形成
          抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下
          轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的氧化低密度脂蛋白
          (ox-LDL)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣
          品中人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)濃度。
          試劑盒組成
          1 30 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶
          2 酶標(biāo)試劑6ml×1 瓶8 標(biāo)準(zhǔn)品(320µg/L)0.5ml×1 瓶
          3 酶標(biāo)包被板12 孔×8 條9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1 瓶
          4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說明書1 份
          5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 張
          6 顯色劑B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 個(gè)
          標(biāo)本要求
          1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
          馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
          2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
          氧化低密度脂蛋白ELISA試劑盒操作步驟
          1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
          釋。
          160µg/L 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
          80µg/L 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
          40µg/L 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
          20µg/L 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
          10µg/L 1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150µl 的2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
          2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、
          待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,
          然后再加待測樣品10µl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡
          量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
          3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
          4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
          5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此
          重復(fù)5 次,拍干。
          6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50µl,空白孔除外。
          7. 溫育:操作同3。
          8. 洗滌:操作同5。
          9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50µl,再加入顯色劑B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
          15 分鐘.
          10. 終止:每孔加終止液50µl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn))。
          11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應(yīng)在加終止
          液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
          操作程序總結(jié):
          計(jì)算
          以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的
          OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo)
          準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),
          即為樣品的實(shí)際濃度。
          注意事項(xiàng)
          1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未
          用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
          2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
          3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
          控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
          4.請(qǐng)每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值
          大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計(jì)
          算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
          5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
          6.底物請(qǐng)避光保存。
          7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
          8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
          9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
          10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。
          氧化低密度脂蛋白ELISA試劑盒保存條件及有效期
          1.試劑盒保存:;2-8℃。
          2.有效期:6 個(gè)月

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