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          牛肺疫抗體(ECP Ab)酶聯(lián)免疫分析試劑盒

          發(fā)布時(shí)間: 2019/6/18  點(diǎn)擊次數(shù): 1098次
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          牛肺疫抗體(ECP Ab)酶聯(lián)免疫分析試劑盒

          本試劑盒僅供研究使用。

          檢測范圍 96T

          使用目的:本試劑盒用于測定牛血清樣本中肺疫抗體(ECP Ab)表達(dá)。

          實(shí)驗(yàn)原理

          本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中牛肺疫抗體(ECP Ab)表達(dá)。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中肺疫抗體(ECP Ab)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中牛肺疫抗體(ECP Ab)的存在與否。

          試劑盒組成

          牛肺疫抗體(ECP Ab)酶聯(lián)免疫分析試劑盒標(biāo)本要求 

          1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

          2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

          操作步驟

          編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)

          加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
          溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
          配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
          洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
          加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
          溫育:操作同3。
          洗滌:操作同5。
          顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
          終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn))。
          測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

          牛肺疫抗體(ECP Ab)酶聯(lián)免疫分析試劑盒計(jì)算和結(jié)果判定:

            試驗(yàn)有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10

            臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

            陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為肺疫抗體(ECP Ab)陰性

            陽性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為肺疫抗體(ECP Ab)陽性

           

          操作程序總結(jié):

           

          牛肺疫抗體(ECP Ab)酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項(xiàng)

          1.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,本試劑不同批號組分不得混用。

          2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

          3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

          封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

          5.底物請避光保存。

          6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長檢測時(shí),參考波長為630nm

          7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時(shí)必須注意安全。

          保存條件及有效期

          1.試劑盒保存:;2-8℃。

          2.有效期:6個(gè)月

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